8ª PRÁCTICA

07/02/2020
PRÁCTICA Nº8: "TEST DE FILAMENTACIÓN"

FUNDAMENTO
El test de filamentación consiste en la suspensión de una colonia de Candida Albicans en 0'5 mL de suero humano, se incuba a 37ºC durante 2 horas y se observa al microscopio entre porta y cubre.
Se considera positivo cuando se observan prolongaciones de la célula madre sin constricción en su punto de origen (tubos germinales). En este caso se trata de C.albicans.
Si es negativo se trata de otras levaduras. En este caso hay que identificarlas mediante API o VITEX.

MATERIAL NECESARIO

• Muestra: suero.
• Microorganismo: Candida Albicans.
• Pipeta automática de 100-1000 microlitros.
• Portaobjetos.
• Colorantes de la tinción de Gram (cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, safranina).
• Mechero Bunsen.
• Pinzas de madera.
• Paralelas y cubeta de tinción.
• Agua destilada.
• Pipetas Pasteur.
• Cubreobjetos.
• Microscopio óptico. 
  

1º) PROCEDIMIENTO DEL TEST DE FILAMENTACIÓN

1. En un tubo eppendorf, depositar 500 microlitros de suero.
   
2. Con un asa estéril tomamos una colonia sospechosa de C.albicans.
   
3. Homogeneizar el microorganismo con el suero en el tubo eppendorf.
   
4. Incubar durante 3 horas en aerobiosis a 37ºC.
5. Depositamos una gota de la suspensión en un portaobjetos con ayuda de una pipeta Pasteur.
   
   
   
6. Cubrir con cubreobjetos.
   
7. Observar al microscopio óptico el resultado con el objetivo de 40x.
   
   
   
   

2º) TINCIÓN KRUSEI
 Mientras esperábamos las 3 horas de incubación hemos realizado una tinción de KRUSEI:

1. Coger dos o tres colonias aisladas de Krusei sembrado en medio Saboureaud con un asa de siembra estéril y homogeneizarla con la gota de Solución Salina Fisiológica previamente depositada en un portaobjetos.
2. Desecar la extensión colocando el portaobjetos sobre la llama del mechero.
3. Fijar la extensión realizando 3 pases por la llama oxigenada del mechero Bunsen.
4. Realizar la tinción de Gram.
   
   
   
   
5. Visualizar al microscopio.