3ª PRÁCTICA

16/01/2020
PRÁCTICA Nº3: "ANTIBIOGRAMA"

FUNDAMENTO
Permite determinar "in vitro" el grado de sensibilidad de los microorganismos frente a la acción de distintos microbianos.
La técnica consiste en poner en contacto el germen, que hemos cultivado previamente, con distintos antibióticos para ver cual de ellos es el que mejor va como tratamiento.
El fundamento de la actividad antimicrobiana se basa en la unión selectiva del antimicrobiano a determinadas estructuras vitales de la bacteria interfiriendo en su función normal, ya sea inhibiendo de forma competitiva el metabolismo del germen, inhibiendo la síntesis proteica, inhibiendo la replicación del DNA, inhibiendo la síntesis de la pared celular o alterando la permeabilidad del microorganismo.
No es una técnica de rutina en la práctica clínica, pero sí de mucho interés en el estudio de la evolución de las resistencias a lo largo del tiempo, o en la comprobación de las actividades bactericidas de nuevas sustancias antibióticas.
Tiene 4 utilidades principales:
La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un tratamiento antibiótico correcto al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la infección posee mecanismos que le confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no incluirlo como terapia.
En cuanto al tratamiento, el antibiograma no sólo es necesario en la instauración, también resulta útil en el seguimiento e incluso en la confirmación de tratamientos empíricos. En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.
Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la epidemiología. Es necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos clínicos para tomar medidas correctoras.
Por otro lado, también puede tener utilidad diagnóstica porque el perfil de resistencia puede en algún caso orientar en la identificación bacteriana.

MATERIAL NECESARIO

• Microorganismos: Proteus y Klebsiella.
• Bote de desecho.
• 4 placas Müeller Hinton.
• Mechero Bunsen.
• Pinzas metálicas.
• 2 sobres de Amoxicilina.
• Asas de siembra estériles desechables.
• 2 botes de Solución Salina Fisiológica.
• Discos de antibióticos: CHLORAMPHENICOL, CEFOXITIN, CEPHALOTHIN, VANCOMYCIN.
• 2 hisopos.
  

PROCEDIMIENTO

1.  Preparar un inóculo de cada microorganimo. Para ello, hemos cogido unas colonias de Klebsiella con un asa de siembra estéril desechable y las hemos introducido en un bote de solución salina fisiológica (SSF) de 5 mL. Hacer los mismo con Proteus, en otro bote de SSF.
   
   
   
   
   
   
   
2. Incubar unos 10-15 minutos.
3. Sembrar en masa el microorganismo (Klebsiella) en 2 placas Petri con el medio Müeller Hinton. Realizar el mismo procedimiento con Proteus (sembrar en 2 placas de Petri con un hisopo distinto).
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
4. Flamear unas pinzas metálicas y colocar un disco de cada antibiótico en 2 placas de Petri, es decir,depositar un disco de cada uno de los 4 antibióticos distintos en una placa de Petri de Proteus y en otra de Klebsiella.
   Nota: Los discos deben estar separados entre ellos aproximadamente 20 mm y 15 mm del borde de la placa.
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
5. En las otras 2 placas de Petri del medio Müeller Hinton (una perteneciente a Klebsiella y otra a Proteus) colocar con unas pinzas metálicas una tira de "Amoxicillin" en cada una de las placas.
   
   
   
   
6. Incubamos las placas en posición invertida a 37ºC durante 18-24 horas.

RESULTADOS:
Al día siguiente de clase, medimos los halos de inhibición e interpretamos los resultados.

- Discos de antibióticos:
PROTEUS:

• Vancomicina: Resistente.
• Cefoxitina: Sensible (1'6 cm).
• Cefalotina: Sensible (0'9 cm).
• Cloranfenicol: Sensible (2 cm).
  

KLEBSIELLA:

• Vancomicina: Resistente.
• Cefoxitina: Sensible (2'1 cm).
• Cefalotina: Sensible (2 cm).
• Cloranfenicol: Sensible. No se puede medir porque se han juntado los halos.
  

- Amoxicilina:

• Klebsiella: Resistente (no aparece halo de inhibición).
  
• Proteus: Sensible. Concentración inhibitoria: 25.